摘要
两眼蜱属埃及非地方性蜱类，有记录是来自进口动物。本研究于2022年开展，目的是监测埃及单峰骆驼、牛和蛇身上的弱眼虫。在这项研究中，对400头骆驼、200头牛和两条蛇(蟒蛇科)进行了蜱虫感染检查。收集的标本根据形态特征进行鉴定，并通过12S rRNA基因的系统发育分析进行鉴定。在骆驼身上发现了变异无眼绦虫和鳞状无眼绦虫，但在牛身上未发现无眼绦虫。与其他产自几内亚比绍和
介绍
全球约有138种蜱属，约占世界蜱类总数的20% (Guglielmone et al. 2015;Okely et al. 2022)。该属植物分布于新热带、非洲热带和澳大拉西亚地区，其中新热带地区的多样性最高(Barker and Burger 2018;Horak et al. 2018)。据报道，该属蜱中有多种病原体，如伯氏疏螺旋体、埃利希氏体、立克次体和无形体(Ogrzewalska等人，2019;Jiang et al. 2021;Saijuntha et al. 2021;邱等人2021;Vieira et al. 2022)。
在埃及，仅有6种非地方性蜱虫(Okely et al. 2022)。在邻近地区，在苏丹、埃塞俄比亚、尼日利亚和索马里等国，从单峰骆驼和牛等家畜身上采集到了Amblyomma属(Okely et al. 2021)。这些种类分别是:黑钝钝钝钝，粗钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝钝。Hoogstraal 1952,1956;El Kammah et al. 2001,2007;Ghoneim et al. 2017,2020;Elhelw et al. 2021;Okely et al. 2021)。据报道，埃及只有一次从进口牛身上传播到开罗(Robinson 1926)。Ghoneim et al.(2017,2020)记录了埃及开罗Basatin屠宰场进口单峰骆驼携带的A. hebraeum。El Kammah等人(2001,2007)记录了marmoreum Amblyomma，但没有关于其宿主的数据。在埃及的一些研究中已经报道了双盲蝽、鳞片和变异斑蝽(Hoogstraal 1952,1956;Youssef et al. 2015;Ghoneim et al. 2017,2020;Elhelw et al. 2021;Okely et al. 2021)。
蛇蜱(Amblyomma latum)是一种硬蜱，分布在非洲热带地区，尤其普遍存在于撒哈拉以南非洲国家(Guglielmone和Robbins 2018)。有几个鳞片动物科被记录为所有寄生阶段的主要寄主，啮齿动物(Muridae)中也有未成熟阶段的报告，偶有从无尾动物、陆龟、啮齿动物和soricomorphs中收集到的成虫(Guglielmone et al. 2014;Horak et al. 2018)。
在本研究中，我们通过形态学和分子鉴定确认了在埃及存在的两眼蝇种，并估计了在埃及记录的两眼蝇种与GenBank记录的其他两眼蝇种之间的系统发育关系。此外，我们报告了在埃及的第一个记录，在蛇侵染。
材料与方法
2022年，在埃及进行了几次收集旅行，以监测来自家养和野生动物的双蜱物种。共对600头家畜(400头单峰骆驼和200头牛)和2条蟒蛇科蛇类进行了检测。骆驼、牛和蛇分别每月检查一次、两次和一次。在Birqash骆驼市场对骆驼进行了检查，在牛场对牛进行了检查，在活蛇交易市场对蛇进行了检查(图S1)。采用ArcGIS v.10.3制图软件(Esri, Redlands, CA, USA)对各动物采集点进行地理参考(表1)。
用细钳从动物身上取出所有弱视瘤标本，保存在含70%乙醇的小瓶中保存。在艾因沙姆斯大学昆虫学系寄生虫学实验室，加入20%甘油滴液进行形态鉴定。利用诊断特征和识别键对标本的形态特征进行种级鉴定(Hoogstraal 1956;Voltzit和Keirans 2003;Walker et al. 2003;Okely et al. 2021)。形态学特征观察采用CZM4立体显微镜(Labomed, Fremont, CA, USA)， Am Scope LED-144 W-ZK白色可调亮度。使用Am Scope MU1000 10MP显微镜相机(Am Scope, Irvine, CA, USA)对物种进行拍摄。在70%乙醇中保存标本，提取DNA。使用QIAamp DNA迷你试剂盒(Qiagen, Hilden, Germany)按照制造商的说明提取DNA。DNA保存在-20°C直到使用。根据Norris et al.(1999)，利用引物(5′-GAGGAATTTGCTCTGTAATGG-3′和5′-AAGAGTGACGGGCGATATGT-3′)进行12S rRNA基因的PCR扩增。
扩增的PCR产物从琼脂糖凝胶中切除，纯化，并送去测序。Sanger测序由Solgent(大田，韩国)进行。然后使用BLAST对序列进行分析(Johnson et al. 2008)，确认它们属于弱视瘤。序列数据(GenBank acc)评分。OP775457, OP785088, OP785089，和OP783984)与GenBank参考数据编译，代表非洲热带及相关的amblyoma(32个序列)。在GenBank序列数据中，蜱虫物种的错误识别是一个日益严重的问题，只能通过对潜在进化树进行相对完整的分类群采样来解决。以硬蜱Ixodes spp. (L43903, MF095802和MF095798)为外群分类群，对从埃及采集的蜱和GenBank数据库中可获得的其他蜱种进行系统发育树估计。序列数据采用MAFFT (Q-INS-i, 200PAM/k = 2;空位打开罚分，1.53)(Katoh et al. 2002)。在MEGA v.7.0.14 (Kumar et al. 2016)中使用BIC计算选择最佳核苷酸替代模型，确定为TN93 + G，具有5个伽马率类别。在MEGA中使用1000个bootstrap重复进行最大似然分析。
结果
形态学鉴定
采集到羊蜱66只(表2)。骆驼被鳞片蜱和变异蜱成虫感染。两条蛇中的一条只感染了一只拉叶蚜若虫。鳞草与杂交种的主要诊断形态学特征是:鳞草的釉质纹饰中缘有密集粗大的斑点，而杂交种的釉质纹饰光滑;侧正中区釉质纹饰在白花蒿大，而在斑叶蒿无;在11株花中，有6 ~ 8株花有珐琅质，而变种花没有珐琅质;螺旋线板的内侧和后缘略直，背侧延长较宽，在鳞甲中几乎垂直于螺旋线板轴线，而在斑甲中螺旋线板的内侧和后缘为直，背侧延长为三角形，很窄，与螺旋线板轴线形成钝角(图1和图2)。
男性鳞状弱视:(A)背照;(B)腹侧位;(C, D) coxae;(E)气门
男性异长弱视:(A)背照;(B)腹侧位;(C, D) coxae;(E)气门
系统发育分析
通过12S rRNA基因的系统发育分析证实蜱属鉴定。扩增的12S rRNA序列长度在埃及所有检测的两眼瘤物种中被发现是相似的(大约。300个基点);剪去各序列的低质量端后，序列长度约为250 bp。从进口骆驼采集的lepidum 12S rRNA序列具有99.99%的相似性，与来自以色列(KPU987776)和苏丹(LC612437和LC612433)的lepidum标本(bootstrap支持度为96%)为单系群，与来自阿根廷的neumanii a . (KU284862和KU284861)形成独立但支持度较弱的姐妹分支，bootstrap值为36。从吉萨省的进口骆驼中采集的a . variegatum样本与来自几内亚比索(KU568495)和
基于12S rRNA序列的埃及鳞翅目蜱、变异蜱和拉丁蜱与其他蜱种的系统发育关系
目录
摘要 介绍 材料与方法 结果 讨论 参考文献 致谢 作者信息 道德声明 搜索 导航 ＃＃＃＃＃讨论
蜱虫标本的正确种类鉴定是更好地了解蜱虫生态学、宿主使用模式、生命周期和流行病学的关键一步(Estrada-Peña et al. 2017;Okely等人。2021;Perveen et al. 2021)。蜱的形态特征和分子标记包括16S rRNA、12S rRNA、cox1、18S rRNA、28S rRNA、ITS1 rDNA和ITS2 rDNA (Cruickshank 2002;Nava等人，2009;Araya-Anchetta et al. 2015;Estrada-Peña et al. 2017)。在这项研究中，我们利用形态学特征和12S rRNA基因序列数据鉴定了在埃及记录的两形瘤物种。尽管由于标本损伤，无法利用形态学特征对其进行鉴定，但在系统发育背景下，利用分子数据对其进行了鉴定。因此，分子蜱虫鉴定有助于克服与形态学鉴定相关的一些困难(Abouelhassan et al. 2019)。
本研究以进口骆驼为主要侵染对象，分别为鳞片甲和变异甲;采集到的标本数量最多的是鳞草。我们的发现与之前的研究一致(Abdel-Shafy and Allam 2013;Hassan et al. 2017;Okely等人(2021)报道了这些物种来自埃及骆驼市场的进口骆驼。系统发育分析表明，该研究样本序列与来自苏丹、几内亚比绍和乌干达等非洲国家的同一物种具有亲缘关系。由于在本研究中检查的牛是埃及本土的，而不是从其他国家进口的，因此没有从牛身上收集到任何种类的弱视瘤。与以前的研究一样，在埃及的本地牛中没有记录到弱视瘤物种。然而，也有研究报告从埃及进口的牛中发现了A. lepidum和A. variegatum (Robinson 1926;Hoogstraal 1956;Okely et al. 2022)。因此，我们的结果和以前的研究表明，埃及的本地牛没有感染羊眼病。
非法野生动物贸易是一种带来若干生态和公共卫生问题的做法，例如人畜共患病原体的传播及其疾病的不断出现，以及将外来动物引入新的地理区域(Brianti等人，2010年;Bezerra-Santos et al. 2021)。人们越来越担心，如果没有现有的立法和法规，国际贸易将会由于新出现的传染病而导致生物多样性的丧失和世界范围内几种动物物种的灭绝(Smith等人，2009年)。近年来，世界范围内的活爬行动物贸易有所增加，威胁到野生动物保护和公众健康(Franke和Telecky, 2001年)。外来爬行动物的国际贸易增加了外寄生虫及其病原体被引入新的地理位置的机会(Burridge 2001)。蜱类是国际贸易的外来爬行动物中报告最多的寄生虫(Mihalca 2015)，而在进口爬行动物和外寄生蜱中调查的传染性病原体是一个公共卫生问题(Takano et al. 2010)。
蜱虫被引入新的外来地区的数量增加了，甚至在发达国家也造成了问题(Burridge 2001)。据报道，在世界上一些国家，外来蜱虫通过爬行动物进入一个新的地理区域。例如，在意大利，从北非进口的龟被蜱虫感染(Brianti et al. 2010);Mihalca(2015)对欧洲进口的外来爬行动物蜱虫进行了研究，蜱虫属为Hyalomma属和Amblyomma属。在国际爬行动物贸易中，波兰首次报告了几种无足虫(Nowak 2010)。在美国，从进口爬行动物中首次发现了消歧弱视(Pietzsch et al. 2006)。最近，埃及出现了大量的外来爬行动物贸易，尤其是作为宠物的蛇(Satour and Dewir 2018;Jensen et al. 2019)。本文首次报道了进口到埃及的非洲蟒蛇的A. latum。
系统发育分析表明，所采集到的拉丁美洲古猿序列与南非标本密切相关，尽管在种群水平上存在一定的序列差异。不同的分支长度，但埃及和南非的latum之间的高度相似性(图3)表明，在地理距离上存在一些较小的种群水平差异效应，可能是由于爬行动物宿主有限的传播能力。从历史上看，latum在非洲热带动物地理区域之外被发现，并可能由于活爬行动物的国际贸易而被引入世界不同地区(Guglielmone et al. 2014)。从美国佛罗里达州(新北极地区)的进口蟒蛇身上采集到乳白色钝瘤(Burridge et al. 2006;Corn et al. 2014)和Python regius进口到阿根廷和智利(新热带地区)(González-Acuña et al. 2005)。在日本(古北地区)，该物种侵染从加纳进口的p.r igius (Goka et al. 2013;Andoh et al. 2015)和从马达加斯加进口的白榆(Qiu et al. 2021)。从从加纳进口到波兰(古北地区)的白斑瓦努斯(Varanus exanthematicus)中采集到扁豆状钝瘤(Nowak 2010)。
最后，本研究建议监测来自埃及不同生态区的进口野生动物和家畜的蜱类及其病原体。
电Nic补充材料
以下是电子补充材料的链接。